副驾驶首先把头顶仪表盘的安全带开关上下连续开关2次，客舱内可以听到“砰，砰”的两声电子音，乘客头顶上的安全带灯也亮起，有经验的乘客们也知道飞机这时候马上就要起飞了。乘务员再次开始舱内广播，提醒乘客再次检查是否系好安全带。
驾驶舱内副驾驶打开内侧着陆灯，这是为了防止相撞而设置在左右机翼下的大灯，规定从起飞到升空至10000英尺之前该灯必须处于打开状态。
接着打开连续发动机点火开关，这个是为了防止发动机在空中熄火而设置的，比如我们一般家庭的煤气灶台在做饭时打开煤气筏，只要点一次点火器就可以了，但飞机上为了防止意外，需要不断地点火。
下一步是打开飞机位置灯和频闪灯，位置灯是三色指示灯，位于机翼两侧翼尖和机尾，颜色分别为左红右绿尾白；防撞频闪灯，一共有5个，全部为白色，2个位于机身背部和腹部，另外3个分别位于两个主翼翼尖和机尾处。
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飞机在飞行时，尽管天空非常广阔，但由于飞行速度很快，机场附近的交通量又大，因此仍然可能发生相撞事故。为了避免这种危险，飞机在夜间航行时，必须打开位置灯。如果飞行员能同时看见远处三盏灯，这说明在自己的上空或下方有飞机在飞行，这时是没有危险的。如果只能看到红色和绿色的航行灯，说明有一架飞机正在迎面飞来，有对撞的危险，要设法避开。如果只能看见一盏红灯或绿灯，那说明在左侧或右侧有飞机在飞行，只要不偏离航线是不会相撞的。
起飞前还要打开自动应答机开关。现代客机都装备了机载防撞系统TCAS（Traffic Alert and Collision Avoidance System），防撞系统可显示飞机周围的情况，并在需要时提供语音告警，同时帮助驾驶员以适当机动方式躲避危险，这些都有助于避免灾难性事故的发生。TCAS系统需要飞机上都装有应答机才有作用。
一系列准备完成，机长和副驾驶共同执行起飞前检查单，如下图（波音737－500，虚线下的部分）
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确认无误后，并再次观察两侧没有飞机车辆等交通后，机长驾驶飞机转弯上跑道，
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并把前起落架对准中心线，加大发动机推力。
飞机就要正式起飞了。